1.病毒分离 当病猪开始出现症状时尽早宰杀,无菌采集扁桃体、脑和肺,并制成悬液,接种原代PK细胞或猪甲状腺细胞。如果细胞培养出现合胞体病变、血吸附和血凝特性,即可证明有HEV存在:否则应继续盲传2代才能做出结论。当发病超过2d,分离病毒就很困难。分离病毒需无菌采取內g出现症状的病猪的呼吸道分泌物,脑或脊髓等按常规方法处理后,接种于猪单层胎肾原代细胞或猪甲状腺单层细胞培养。接种后12h,观察有无融合细胞形成。如果有HEV存在,可在接种后24h至48h出现融合细胞。分离的舶病毒可用血凝试验、血细胞吸附试验、血凝抑制试验、血细胞吸附抑制试验、血清中和试验、荧光抗体染色、电镜和免疫电镜检查鉴定。
2.血清学试验 猪感染HEV后第7天开始产生抗体,2-3周达到最高峰。从发病的母猪和存活同窝仔猪采取血清,做血凝抑制试验、血细胞吸附抑制试验、琼脂扩散试验、间接免疫荧光试验及血清中和试验也可确诊。HI和SN试验可用于猪血清中HEV抗体的检测,两者具有基本相同的敏感性。还可用空斑减数试验。由于病毒的亚临床感染非常普遍,一般要应用双份血清做出评价,为此首份血清需在症状刚出现后2d内采集,经过6-7d以后猪已显现症状,此时可能已经产生高滴度抗体,难以做出比较性评价。
3.鉴别诊断 HEV感染须与捷申病(猪传染性脑脊髓炎)和伪狂犬病相区分。后两种病显示的脑脊髓炎通常比HEV感染更为严重,而且无论大、小猪都有发生。大猪出现呼吸道症状,母猪出现流产是伪狂犬病的典型表现。病毒培养时,这些病毒均能在PK和猪甲状腺细胞培养中生长,但在PK细胞中,CPE有所不同。此外,HEV有血凝性,其他两种病毒没有血凝性,据此也可区分它们。
猪血凝性脑脊髓炎没有临床特征,根据症状和流行情况只能做出推测性诊断。因此,临诊本病困难,特别是把Teschen病同本病区别开来。病毒分离鉴定、血清学试验可帮助确诊。
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