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猪巨细胞病毒感染的诊断

发布日期:2013年07月10日 来源:中国养猪网
 

1.病毒分离与鉴定

可采集胎儿或新生仔猪的鼻汁或鼻腔、喉头、结膜等拭子以及肺、肾、淋巴结等材料,接种肺泡巨噬细胞或输卵管类成纤维细胞,进行病毒分离,也可以用肺泡巨噬细胞直接培养分离病毒。接种病料后培养7-14d,观察细胞病变。用荧光抗体染色检查细胞核内包涵体出现情况,或检查细胞浆内的荧光抗原。如用已知标准毒株的免疫血清,以标准的病毒培养物为对照,对分离毒株进行中和试验,可对病毒分离物予以鉴定。病毒的形态观察和理化学特性检查,也有一定的参考价值。电镜检查在感染的细胞核和细胞浆内(主要为空泡内)能发现结晶状排列的病毒。

2.组织病理学的包涵体检查

对于全身感染的病猪,可采取鼻黏膜或其刮削物作组织染色标本检查,根据在鼻黏膜管状腺见到特征性成丛的膨大细胞及嗜碱性核内“鹰眼形”包涵体,不难作出诊断。也可根据组织切片中的嗜碱性核内包涵体和巨细胞作出诊断,或作冰冻切片,用免疫染色法检测病毒抗原,继而作出诊断。在急性感染的:幼龄仔猪肾和脑等组织,也可见到这种包涵体。

3.血清学检测

血清抗体检测是确证猪群中存在猪巨细胞病毒最可信的方法,本法也可以用于对剖腹产猪进行监测。对育肥猪随机采集血清样品,用IIFELISA检测PCMV抗体,很易确诊。对育肥猪随机采取血清样品做间接免疫荧光试验(IFA)或者ELISA测定,将感染病毒的肺泡巨噬细胞或类成纤维细胞用丙酮固定,然后进行间接荧光抗体染色法检查,其试验敏感性比病毒中和试验至少高8倍,而且还可对不同类别的IgGIgM抗体予以鉴别。人工感染后3周可检出抗体,6周后达最高值并一直持续到屠宰。现场猪的抗体效价多为64-128倍。也可应用感染的输卵管类上皮细胞作ELISA,它与间接免疫荧光抗体试验具有相同的敏感性。现场猪在2-3周龄感染病毒,血清抗体在56周龄转阳,并呈终生持续感染。Tajima( 1994)以血纸法建立了ELISA法,并将全血检查法与血清检查法的抗体效价进行了比较,样品的吸收值高度相关,对26份田间收集血纸的检查,发现这些仔猪出生后8周母源抗体水平下降,并从4头猪中检出IgM抗体,

4。分子生物学检测

Hamel( 1999 )首次报道了应用PCR诊断本病,采用直接从具有不同临床综合征的病猪肺和鼻黏膜的刮削物中提取DNA检查的方法,在126份样品中检出59份阳性样品,该方法有可能成为猪巨细胞病毒检查和监测的常规方法。之后,Fryer( 2001 )用定量竞争PCR对不同的猪器官(包括用于异种移植供体)进行了病毒的检测,可以从每微克DNA中检出低于1097个基因组拷贝。

5.鉴别诊断

呈现传染性鼻炎症状的仔猪,特别是1-3周龄患鼻炎的病猪,要考虑剑发生本病的叮能性。猪巨细胞病毒感染症易与伪狂犬病、猪腺病毒感染、猪细小病毒感染、日本乙型脑炎等相混淆,其鉴别依据在于猪巨细胞病毒感染症在某些上皮细胞内形成巨大的嗜碱性核内包涵体,不引起母猪流产。

近年来猪呼吸繁殖综合征比较普遍,猪肺巨噬细胞常用以分离PRRSV,有时能发现PCMV


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