本品系用口蹄疫病毒A、O、C、Asia I型毒种和猪水疱病病毒毒种分别高度免疫豚鼠或猪,分离血清,提取免疫球蛋白,致敏红细胞制成。用于口蹄疫和水疱病的鉴别诊断。
【性状】静置后,致敏红细胞沉于瓶底,上层为淡黄色透明液体。振摇后,致敏红细胞均匀分散于溶液中。
【作用与用途】用于鉴别诊断口蹄疫和水疱病的反向间接血凝试验。
【用法与判定】 (1)使用标准阳性血清对O型口蹄疫和猪水疱病进行鉴别诊断时,按以下方法。a.在96孔血凝滴定板上,每份被检样品做4排孔,每孔先各加25uL稀释液。b.每排第1孔各加被检样品25tuL,然后分别由左至右进行2倍系列稀释至第7孔(竖板)或第11孔(横板)。每排最后孔留作空白对照。c.加标准阳性血清在第1排和第3排,每孔加稀释液25uL。在第2排,每孔加入1:20稀释的O型口蹄疫标准阳性血清25uL。在第4排,每孔加入1:100稀释的猪水疱病标准阳性血清25uL。 放微型混合器上振荡1-2min,加盖,置37℃作用30min。d.加致敏红细胞诊断液在第1排和第2排,每孔加入1%O型口蹄疫抗体致敏红细胞悬液25uL。 在第3排和第4排孔,每孔加入1%猪水疱病抗体致敏红细胞悬液25uL。将血凝滴定板置微型混合器上振荡1-2min,加盖,放室温2h后观察结果。e.结果判定若第1排出现2孔以上的凝集(50%以上凝集),且第2排相对应孔出现2个孔以上的凝集抑制;第3、4排不出现凝集,判为口蹄疫O型阳性。若第3排出现2个孔以上的凝集(50%以上凝集),并且第4排对应孔出现2个孔以上的凝集抑制,第1、2排不出现凝集,则判为猪水疱病阳性。以能引起50%红细胞凝集的被检样品最大稀释度为被检样品的血凝效价。
(2)使用标准抗原对口蹄疫各型和猪水疱病进行鉴别诊断时,按下列方法操作。a.被检样品的稀释取试管8支,自第1管开始由左至右用稀释液进行2倍系列稀释(即1:6、1:12、1:24……1:768),每管0.5mL。b.滴加被检样品 在血凝滴定板上的第1至第5排,每排的第8孔滴加第8管稀释被检样品2滴,每排的第7孔滴加第7管稀释被检样品2滴,以此类推至第1孔。每排的第9孔滴加稀释液2滴,作为稀释液对照,每排的第10孔按顺序分别滴加A、O、C、Asia工型口蹄疫和猪水疱病标准抗原(1:30稀释)各2滴,作为阳性对照(注意每型换滴管1支)。C.滴加致敏红细胞诊断液先将红细胞诊断液摇匀,于滴定板第1至第5排孔分别滴加A、0、C、Asia I口蹄疫及猪水疱病致敏红细胞诊断液,每孔1滴,置振荡器上振荡1-2分钟,放置20-25℃,1.5-2小时后判定结果。如果被检样品来自牛、羊等偶蹄兽,仅用口蹄疫4个型的致敏红细胞诊断液;如果被检材料来自猪,除用上述4种诊断液外,还用猪水疱病红细胞诊断液。d.结果判定 (a)观察血凝板上各排孔的凝集图形,如果只有第1排孔凝集,且稀释液对照孔不凝集,阳性对照孔凝集,则证明此种凝集是与A型红细胞诊断液同型病毒所致的特异性凝集,被检样品即判为A型。若只有第2排孔凝集,其余4排孔不凝集,则待检抗原为O型,以此类推。(b)致敏红细胞50%凝集的被检样品最高稀释度为其凝集效价。(c)出现2排孔以上的凝集时,如某排孔的凝集效价高于其余各排孔的凝集效价至少4倍,即可判为阳性,其余判为阴性。
【注意事项】保存与使用中,勿冻结,勿倒置。
【贮藏】在2-8℃,有效期为6个月。
附注:凝集反映强度标准
++++ 100%凝集。红细胞均匀地分布于孔底周围。
+++ 75%凝集。红细胞均匀地分布于孔底周围,但孔底中心有红细胞形成的针尖大的小点。
++ 50%凝集。孔底周围有不均匀的红细胞分布,孔底有一红细胞沉下的小点。
+ 25%凝集。孔底周围有不均匀的红细胞分布,但大部分红细胞已沉积于孔底。
一 不凝集。红细胞完全沉积于孔底成一圆点。