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猪人工授精实验室操作规程【图】

发布日期：2016年02月19日　来源：学养猪
1、配制0.9% 盐水

称9克氯化钠放入盐水瓶，加蒸馏水达1000mL，紧塞瓶口后，放进蒸锅消毒，开水蒸煮30分钟，冷却后即可使用。0.9%等渗生理盐水是用来清洗各类与精液直接接触的器皿。此盐水的浓度与精液渗透压相近，不会引起精虫的死亡，如用蒸馏水，将使精虫致死。


2、玫瑰红染色液配制

称3克玫瑰红，加入99mL蒸馏水，用玻璃棒搅匀后，再加1mL40%福尔马林。此稀释剂用于对精虫进行染色，以便于检查异常的精子。

3、稀释液配制

精液稀释液是与新鲜精液渗透压接近，用于扩大精液容量，给精子提供营养、中和精子代谢产物、保持精液PH值的生理溶液。

4、采精量测定

按照规范的采精操作，公猪的采精量一般在100~500mL，平均220mL。每头公猪的采精量应相对比较稳定。如果公猪的采精量超出正常范围， 或与以往采精量明显不同，应注意查找原因。公猪精液的比重约为1.02克/mL，接近于1，因此，适合用称重的方法来测量采精量。每克重量精液的体积约为1mL。

5、精液稀释与保存

(1) 精液的稀释

精液稀释时，一定要强调原精液与稀释液的温度要尽量一致，温度相差在2℃以内。根据计算所得的稀释后总精液体积，缓缓加入稀释液，稀释液加入应沿着杯壁倒入，禁止将稀释液从高处倒入，形成冲击力。稀释液的最终加入量应使精液和稀释液的总体积达到所计算的稀释后体积（或重量）。加入稀释液过程中，应一边加入稀释液，一边轻轻摇动烧杯或用洁净的玻璃棒搅拌。

(2) 精液的分装

精液稀释5分钟后，应再一次检查精子活力，如果活力没有下降，方可进行分装。调好精液分装机，以每80~100mL为单位，将精液分装至精液瓶或袋。实验室室温最好控制在20~25℃，以免在精液稀释分装处理过程中， 精液受到环境温度的影响。空气中的氧气不利于精子的保存，因此，精液封装时应尽可能将其中存留的空气排出。

精液瓶在拧上盖子时，先将瓶盖旋大半圈左右，然后挤压瓶体使精液液面上升至瓶口，再旋紧，以排出瓶中空气。袋装精液在封口时，也应先将其中的空气挤压，使精液面上升到接近封口处的高度，再用热封口机热封。

(3) 精液的保存

A、保存温度：稀释好的精液应保存在有报警装置的电子恒温箱中，恒温箱内温度保持在16~18℃；

B、每隔12个小时轻轻翻动一次，防止精子沉淀而引起死亡；

C、稀释的精液可在保温箱内保存约3天。超过3天的精液，质量将开始下降，不能用于人工授精；

D、输精前作精液检查：向试管倒入1~2mL精液，把试管放在37~38℃的恒温水浴箱中加温5分钟，取出精液轻轻摇匀，用已灭菌的滴管取1滴放于预热的载玻片，置于37℃的恒温板上片刻，用显微镜检查活力，精液活力≥ 0.7，方可使用。

6、精液的运输

精液运输应置于保温箱内，保持在16~18℃，运输过程中避免强烈震动。

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